一、酶标仪工作原理
酶标仪（Microplate Reader）是一种专门用于酶联免疫吸附试验（ELISA）等微孔板检测的光学仪器。Synergy 酶标仪采用高性能光学系统和先进的检测技术，可实现吸收光、荧光、发光等多种检测模式。
二、ELISA 实验流程
1. 包被
- 用包被缓冲液稀释抗体至合适浓度（通常 1-10μg/mL）
- 每孔加入 100μL，4℃包被过夜
- 弃去包被液，用 PBST 洗板 3 次
2. 封闭
- 每孔加入 200μL 封闭液（5% BSA 或脱脂奶粉）
- 37℃封闭 1-2 小时
- 洗板 3 次
3. 加样
- 加入标准品和待测样品，每孔 100μL
- 37℃孵育 1-2 小时
- 洗板 5 次
4. 加酶标二抗
- 加入适当稀释的酶标二抗，每孔 100μL
- 37℃孵育 1 小时
- 洗板 5 次
5. 显色
- 加入 TMB 显色液，每孔 100μL
- 37℃避光显色 15-30 分钟
- 加入终止液（2M H2SO4），每孔 50μL
三、酶标仪检测参数设置
1. 波长选择
- TMB 底物：检测波长 450nm，参考波长 630nm
- OPD 底物：检测波长 492nm
- ABTS 底物：检测波长 405nm
2. 读板模式
- 单波长检测：适用于单一显色反应
- 双波长检测：扣除背景干扰，提高准确性
- 动力学检测：监测反应过程，获取反应速率
四、数据分析与质量控制
1. 标准曲线绘制
- 使用四参数逻辑回归（4-PL）拟合
- R²值应大于 0.99
- 标准品复孔 CV 值应小于 10%
2. 样品浓度计算
- 根据标准曲线方程计算样品 OD 值对应的浓度
- 考虑样品稀释倍数
- 剔除超出标准曲线范围的样品
五、注意事项
- 洗板要彻底，避免残留导致背景升高
- 加样要准确，避免产生气泡
- 显色时间要严格控制，避免过显色
- 每块板都要设置空白对照和阳性对照